冻干人纤维蛋白原制造及检定规程

本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆中分离、提纯、冻干并经病毒灭活处理制成。主要成份为纤维蛋白原，纯度在70%以上。含适量枸橼酸钠、氯化钠和葡萄糖作为稳定剂。不含防腐剂，专供静脉输注用。用于治疗产后大出血及因大手术、外伤或内出血等引起的纤维蛋白原缺乏而造成的凝血障碍。

1　制造

1.1　制造要求

1.1.1　对血浆的要求

1.1.1.1　血浆应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》要求

新鲜分离的液体血浆或冰冻血浆，去除冷沉淀以及凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ后的血浆，均可用于生产。

1.1.1.2　分离后的血浆应保持无菌，否则应及时投料制造或低温水冰冻保存。冰冻保存期最长不应超过2年。

1.1.2　对制造工作室、设备及原材料的要求

与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3～1.1.4项要求相同。

1.2　制造工艺

1.2.1　采用低温乙醇法提制，并经卫生部批准的适宜方法进行病毒灭活处理。

1.2.2　分批

同一容器混合溶解的制品作为1批，不同机柜冻干的制品分别作为亚批。

1.2.3　溶解液及稳定剂的规定

溶解纤维蛋白原沉淀用的溶解液所含的稳定剂应符合下列规定：

枸橼酸三钠（2H2O）　1.2%（g/ml）

注射用葡萄糖5%（g/ml）

氯化钠0.85%（g/ml）

1.2.4　除菌过滤及分装

制品可直接滤入无菌的成品瓶内，每瓶纤维蛋白原装量应不少于出品规格。

1.2.5　冻干

过滤分装后应立即冻结，　并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1.2.5项的规定进行冻干，在冻干全过程中，制品温度不应超过35℃。

1.2.6　半成品检定

半成品应抽样做理化检查及热原质试验，并按亚批做无菌试验。

1.3　剂型与规格

为冻干剂型，每瓶成品含纤维蛋白原0.5、1.0、1.5或2.0g。

2　成品检定

2.1　抽样

每批成品应抽样作全面质量检定，不同机柜冻干的制品应分别抽样做无菌及水分检定。

2.2　物理检查

2.2.1　外观

应为灰白色或淡黄色疏松体，无融化迹象。重溶后，溶液应澄明或轻微乳光，允许有少量细小絮状物或蛋白颗粒。

2.2.2　真空度

以高频火花真空测定器检测，瓶内应出现蓝紫色辉光。

2.2.3　溶解时间

制品温度应先平衡至30～37℃，按瓶签标示量加30～37℃注射用水，为约1%蛋白浓度溶液，制品应在30分钟内完全溶解。

2.3　化学检定

按《生物制品化学检定规程》进行。

2.3.1　pH值

取2.2.3项下溶液测定，pH值应为6.8～7.8。

2.3.2　水分

水分含量应≤5%（g/g）。

2.3.3　纯度

取2.2.3项下溶液，用生理盐水稀释至每ml含纤维蛋白原2～3mg，用钨酸沉淀法测定蛋白含量。

另取上述稀释液10ml，加入每ml含0.3IU凝血酶溶液10ml，搅匀待凝固后，置一盛水的盘内加罩密封。在室温放置1～2小时。移置2～10℃过夜。然后搅碎凝块，离心（或过滤）分离清液。用钨酸沉淀法测定其残余蛋白量，按下式计算制品的纯度，应不低于70%。

纤维蛋白原制品纯度（%）=（蛋白总量—残余蛋白量）/蛋白总量×100

2.3.4　纤维蛋白原含量

根据2.3.3项的测定结果，按下式计算纤维蛋白原含量，应不低于出口规格。

纤维蛋白原含量（g）=蛋白总%（g/ml）×制品纯度%×总体积（ml）。

2.3.5　枸橼酸离子测定

取2.2.3项下溶液测定，枸橼酸离子含量应为1.1%～1.3%（g/ml）。

2.3.6　葡萄糖含量

应为4.5%～5.5%（g/ml）。

2.3.7　氯化钠含量

应为0.8%～0.9%（g/ml）。

2.4　凝固活力测定

于小试管内加入凝血酶溶液（3IU/ml）0.5ml，置37℃水浴预热1分钟，再中入2.2.3项下的溶液。用生理盐水稀释成每ml含3mg纤维蛋白原，加0.5ml，摇匀。置37℃水浴中观察其凝固时间。两次测定结果平均值应不超过60秒。

2.5　无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。

2.6　安全试验

2.6.1　豚鼠试验

用体重300～400g健康豚鼠2只，每只腹腔注射检品5ml（约1%蛋白浓度），注射后半小时内动物不应有明显异常反应，观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠复度，判定标准同前。

2.6.2　小白鼠试验

用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射检品0.5ml（约1%蛋白浓度），半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上术要求，用10只小白鼠复试一次，判定标准同前。

2.7　热原质试验

按《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量按家兔每kg体重注射30mg纤维蛋白原。判定标准按该规程4.2项要求进行。

2.8　HBsAg检测

用敏感性为1ng/ml以下的试剂盒检测，应为阴性。

2.9　抗HCV检测

用敏感的方法检测，应为阴性

2.10　抗HIV—1及2检测

用敏感方法检测，应为阴性。

2.11　鉴别试验

用免疫双扩散法，仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛血清不产生沉淀线。

2.12　根据病毒灭活方法，必要时增加相应的检查项目。

3　保存与效期

保存于10℃以下干燥处，效期自血浆投产之日起若成品水分含量低于3%者为5年；成品水分含量为2%～5%者为2年。