人白蛋白（或丙种球蛋白）纯度测定

（醋酸纤维素薄膜电泳法）

1试剂

1.1　巴比妥缓冲液（Ph8.6）

取巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，加蒸馏水溶解成1000ml。

1.20.5%氨基黑染色液

取氨基黑10B0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及蒸馏水40ml的混合液中。

1.3漂洗液

取乙醇45ml，冰醋酸5ml及蒸馏水50ml，混匀。

1.40.2mol　/L氢氧化钠

取8g氢氧化钠，加蒸馏水溶解成1000ml。

1.5透明液

取冰醋酸25ml，加无水乙醇75ml，混匀。

2　操作

2.1电泳

将膜条（2×8cm）粗糙面向下，浸入巴比妥缓冲液中，待完全浸透，取出用滤纸吸去多余的缓冲液，将膜条粗糙面向上，加于电泳支架上的滤纸桥上（或桥下），于膜上距负极端2cm处，直线状滴加蛋白质含量约5%的样品2～3μl，通电，电流控制在0.4~0.6mA/cm[总电流量=生产要膜的宽度（cm）×膜条数]，同时取新鲜人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离达3～4cm为宜。

2.2　染色

电泳完毕，将膜条取下浸于染色液中，2～3分钟后，用漂洗液反复漂洗至底色完全脱净。

2.3　透明

将漂净并完全干后的膜条浸于透明液至全部浸透为止，取出平铺于洁净的玻璃板上，干后即成透明薄膜，可供扫描法测定样品纯度和作为标本长期保存用。

2.4　纯度测定

2.4.1　洗脱法：将漂洗净的膜条用滤纸吸干，与正常人血清的电泳图谱作对照，剪下白（或丙种球蛋白）带A及其他杂蛋白质区带B，分别浸于5ml0.2mol/L氢氧化钠溶液中，振摇数次，至色泽完全浸出后，于620nm波长下测其OD值，以相同条件下，无蛋白质部分的膜条（其长度分别同A及B）作空白对照。

样品中白蛋白（或丙种球蛋白）含量%=A的OD值－A空白的OD值/（A的OD值－A空白的OD值）+（B的OD值－B空白的OD值）×100%

2.4.2　扫描法：将干燥的样品醋酸纤维素薄膜电泳图谱放入自动光密度扫描仪，通过反射（未透明薄膜）或透射（已透明薄膜）方式测定各蛋白质电泳区带的OD值，根据仪器性能，可自动或手工方法计算出样品白蛋白（或丙种球蛋白）的百分含量。

附注

用扫描法测定白蛋白（或丙种球蛋白）纯度时，可采用丽春红染色法，其染色液及漂洗液配方如下：

0.2%红染色液：

取丽春红0.2g，磺基水杨酸3g及三氯醋酸3g，用蒸馏水溶解并稀释至100ml。