第二节　甘油三酯测定

甘油三酯又称中性脂肪，由于其甘油骨架上分别结合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，相应称为甘油三酯（TG）、甘油二酯（DG）和甘油一酯（MG）。血清中90%～95%是TG，TG中结合的脂肪酸分别为油酸（44%）、软脂酸（26%）、亚油酸（16%）和棕榈油酸（7%）。

血清TG测定方法一般分为物理化学法、化学法及酶法三大类。

血清中TG的化学组成并不单一，准确求其分子较为困难。因标准不同，测定结果存在差异。化学法多采用三棕榈精（软脂精）（分子量807.3）、三油精（分子量895.4）为标准，按摩尔浓度计算。酶法测定以三油精为标准物进行换算。

1．化学法

化学测定法包括：①TG的抽提分离；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲掌显色定量等四个阶段。操作较为繁杂，影响测定因素太多，本法准确性差，一般很少用。

2．酶法测定

酶法测定包括：①TG的抽提与皂化；②加水分解生成甘油糖定量等二个阶段。目前常规检测应用的方法有甘油激酶（glycerolkinase,GK）法和甘油氧化酶（glycerol Oxidase,GOD）法。操作简便，快速准确，并能在自动化生化分析仪上进行批量测定。

一、乙酰丙酮法

1．原理

血清中加入异丙醇抽提取甘油三酯，经KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸，甘油在过碘酸作用下氧化成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色的3，5二乙酰，1，4二氢甲基吡啶，其颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比，420nm测定定量。该法可用于基本功训练及组织细胞TG的提取测定。

2．试剂组成

代号	种类	浓度	组成	贮2-8℃	有效时间
R1	抽提液		（CH₃）CHOH（A.R）重蒸馏
R2	吸附剂		氧化铝，水洗除去微细颗粒， 110℃烤干3h以上	闭封	一周
R3	皂化剂	5%	KOH 5g+H₂O→100ml
R4	醋酸溶液	2mol/L	CH₃COOH 11.5ml+H₂O→100ml
R5	过碘酸钠	0.05mol/L	NaIO₄1.07g+H₂O→100ml
R6	氧化剂		R4 1体积+R51体积		一周
R7	醋酸铵液		CH₃COONH₂ 15.4g+H₂O→100ml
R8	显色剂		CH₃COCH₂COCH₃0.75ml+R-1
40ml+R-7 100ml+R-4 80ml	显色剂
R9	参考液	2mg/dl	三油酸甘油酯 2mg+R-1→100ml（TG100mg/dl）

3．操作

按图15-3操作。

血清甘油三酯（乙酯丙酮法）测定操作图

图15-3 血清甘油三酯（乙酯丙酮法）测定操作图

4．计算

血清TG浓度=E_SA/E_ST×1.13(mmol/L)

二、酶法（GK-GPO-POD比色法）

血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶（GK）及ATP存在下，生成3-磷酸甘油，尔后，在磷酸甘油氧化酶（GPO）作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H₂O₂，H₂O₂与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶（POD）作用下，生成红色亚醌化合物（quinoneimine），比色（500nm），其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。

（一）手工测定法

1．试剂组成

代号	种类	浓度	贮存2～8℃
R1	磷酸甘油氧化酶	≥3.0KU/L	冷藏
（A液）	抗坏血酸氧化酶	≥1.0KU/L
	甘油激酶	≥0.7KU/L
	4-氨基安替比林	80mg/L
R2	脂蛋白脂酶	≥2.0KU/L	冷藏
	过氧化物酶	≥10KU/L
	ESPAS	300mg/L
R3（参考液）	甘油酸三脂	200mg/dl（2.26mmol/L）	冷藏

*：一般采用商品试剂盒

血清甘油三酯测定法（酶法）操作图

图15-4 血清甘油三酯测定法（酶法）操作图

2．操作

按图15-4操作。

3．计算

血清TG浓度=E_SA/E_ST×2.26(mmol/L)

（二）生化分析仪检测

全自动生化分析仪测定操作（以CL-7200型为例）。

1．试剂

A液：GK，GPO，4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。

B液：POD，Lipase,ESPAS等。

标准液：甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。

2．上机参数

名称	参数
方法	终点法
波长	双波长（540nm 700nm）
试剂A反应时间	2～3min
试剂B反应时间	5～6min
反应温度	37℃
样本用量	4μl
试剂A用量	200μl
试剂B用量	100μl
单位	mmol/L