吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程

本品系精制破伤风类毒素经氢氧化铝吸附制成。用于预防破伤风。

1　毒素制造

制造破伤风毒素应在隔离的具有专用消毒设备的实验室内进行。实验室的墙面、地面及实验台应使用便于消毒的材料。工作人员应经过培训并接受破伤风类毒素全程免疫，以后每10年进行一次加强免疫，凡发生外伤未完全治愈前不能参加工作。

1.1　菌种

1.1.1　应选用中国药品生物制品检定所分发或同意的产毒效价高、免疫力强的破伤风菌株，必要时可对菌种进行筛选。

1.1.2菌种应定期作全面性状检查（如细菌形态、纯菌试验、糖发酵反应、产毒试验及特异性中和试验等），并有完整的传代、检定记录。

1.1.3菌种应用冻干或其他适宜方法保存在2～8℃。

1.2　培养基

制造种子管及毒素培养基所用的酪蛋白、黄豆蛋白、牛肉等蛋白质应适当加深水解。其他原材料应尽量减少对人体产生过敏反应的物质，不得含有可引起人体毒性反应的物质。培养基原材料应保证质量，所用化学原料应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》。

1.3　毒素

1.3.1　毒素制造过程应严格控制杂菌污染，经显微镜检查或纯菌试验发现污染者应废弃。

1.3.2　毒素须经除菌过滤后方可进行下步制造程序，亦可杀菌后进行精制。

1.3.3　毒素Lf测定

用生理盐水将Lf　检定用标准破伤风抗毒素稀释至100Lf/ml，按一定间隔递增量加于一列絮状检定用试管中，每管加待检毒素1ml，摇匀后立即放入50℃水浴中，以首先出现絮状者判定毒素的Lf值，并记录絮状反应时间。

1.3.4用于生产的毒素不得低于40Lf/ml。

2　类毒素制造

2.1　毒素或精制毒素的脱毒

毒素或精制毒素中加入适量甲醛溶液，置适宜温度进行脱毒。所用甲醛溶液等级应不低于化学纯。

2.2　脱毒试验

每瓶取样，用体重300～400g豚鼠1只，皮下注射10ml。精制毒素脱毒者可事先用生理盐水稀释成100Lf/ml，皮下注射5ml，于注射后第7、14、21天进行观察，动物不应有破伤风症状，到期每只动物体重不得较注射前减轻且健存者为合格，发生破伤风症状者应继续脱毒，体重减轻者应予重试。

2.3　脱毒试验合格的类毒素应做Lf测定。类毒素应为黄色或棕黄色透明液体。

2.4类毒素之保存时间，自脱毒合格之日起保存于2～8℃不得超过3年。

3　精制

3.1　毒素或类毒素可用等电点沉淀、超滤、硫酸铵盐析等方法或其他适宜方法精制。

3.2　用于精制的类毒素应透明，无肉眼可见之染菌。

3.3　精制时所用化学药品等级应不低于化学纯或符合《中国药典》规定，蒸馏水应新鲜。

3.4　类毒素精制后应加0.01%(g/ml)硫柳汞防腐并尽快除菌过滤。

3.5用同一菌种、培养基处方、精制方法制造的类毒素在同一容器内混合均匀后除菌过滤者为1批。

4　精制类毒素的检定和保存

4.1pH值应为6.6～7.4。

4.2　无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。无菌试验不合格时可重新除菌过滤，如制品有肉眼可见之染菌应废弃。

4.3　效价测定

每瓶取样进行Lf测定。测定方法见1.3.3项。

4.4　纯度

精制类毒素的纯度应在1500Lf/mgPN以上。

4.5　安全试验

每亚批取样，等量混合，用生理盐水稀释为250Lf/ml，用体重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射2ml。于注射后第7、14、21天进行观察并称体重。动物不应有破伤风症状，局部无化脓、坏死，到期每只动物体重比注射前增加者为合格。

4.6　保存与效期

保存于2～8℃。类毒素精制者自精制之日起，先精制后脱毒制品从脱毒试验合格之日起，效期为3年半。

5　吸附剂配制

5.1　吸附剂配制过程所用的器具应清洁、蒸馏水应新鲜，各种药品等级应不低于化学纯。

5.2　配制氢氧化铝，可用三氯化铝加氨水法或三氯化铝加氢氧化钠法，用氨水配制者需透析除氨后使用。

5.3配制成的氢氧化铝原液应为浅蓝色或乳白色的胶体悬液，不应含有凝块或异物。

5.4　氢氧化铝原液应取样测定氢氧化铝及氯化钠含量。

6　吸附精制类毒素的制造

6.1　吸附制品每ml应含精制破伤风类毒素7～10Lf。

6.2　氢氧化铝用量不得超过3mg/ml。

6.3　吸附制品应加0.005%～0.01%(g/ml)硫柳汞为防腐剂。

6.4同批精制类毒素用同批吸附剂吸附者为1批，用大罐吸附时每罐为1批，但所用精制破伤风类毒素、氢氧化铝各不得超过3批。

7　成品检定

7.1　理化性状

7.1.1吸附精制破伤风类毒素振摇后为乳白色均匀悬液，无摇不散的凝块及异物。

7.1.2pH值应为6.0～7.0。

7.1.3　氢氧化铝含量不应超过3mg/ml。

7.1.4　氯化钠含量应为0.75%～0.9%(g/ml)。

7.1.5　硫柳汞含量不应超过0.01%(g/ml)。

7.1.6　游离甲醛含量不应超过0.02%（g/ml）。

7.2　无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。

7.3　安全试验

每亚批取样等量混合，用体重300～400g，豚鼠4只，每只注射2.5ml于腹部皮下，注射后于第7、14、21天各观察1次并称体重，动物不应有破伤风症状，注射部位无化脓、坏死，到期体重比注射前增加者为合格。

7.4　效力试验

每亚批取样等量混合，用体重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射0.5ml，第30天采心血，分离血清，等量混合，测定破伤风抗毒素单位，至少应含1IU/ml。

抗毒素单位测定方法：

用pH7.0～7.4之硼酸硼砂缓冲生理盐水，将被检血清做系列稀释，各取1ml放入一列试管中，然后各加入5个L+/100量破伤风标准毒素1ml（由0.05IU/ml破伤风标准抗毒素标定），盖上胶塞，混合均匀，放37℃结合45分钟，每个混合液各用体重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml。

同时设对照组，即取0.05IU/ml的标准抗毒素1ml，加入5个L+/100的标准毒素1ml，放37℃结合45分钟。用体重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml，每日观察动物发病情况并记录。以72～120小时动物全部死亡为判定标准。

以被检样品与对照组动物死亡数相同之最高稀释度判定之。

亦可按WHO推荐的效力检定方法（见附录）进行。

7.5　稳定性试验

生产工艺有改变时应做稳定性试验。抽3批不同批号的精制类毒素配制的成品，保存于2～8℃，在效期结束之日，进行效力检定，应符合规程要求。

7.6　鉴别试验

抽取样品加枸橼酸钠将吸附剂溶解后作絮状试验，或将样品调pH至9.0作凝胶免疫沉淀试验，以出现絮状反应或免疫沉淀反应者为合格。

8　保存与效期

保存于2～8℃。自吸附之日起效期为3年半。