|
|
中医书籍
《实用免疫细胞与核酸》 > 第五章 免疫金银及铁标记技术第六节 免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下,供参考。
一、固定剂的选择及固定时间(详见表5-9)
(1)Karovsky's 液pH7.3。 (2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative) 配制见附录一。 表5-9 各种抗原固定剂的选择及固定时间 待检抗原 | 固定剂的种类 | 固定时间 | 蛋白质 | | | 酶 | 冰冻切片不固定,或用95%乙醇,B5固定液 | 10 min | 激素 | 冰冻切片,涂片,印片,不固定或丙酮,甲 | 10 min | 醇,乙醇,PEG固定,B5固定液固定 | 4℃30 min | 免疫球蛋白 | 中性福尔马林,四氯化碳(1%甲醛) | 30 min | 白蛋白 | 95%乙醇含1~5%冰醋酸 | 30 min | 纤维蛋白元 | 同上 | 30 min | 病毒 | 丙酮,100%乙醇,甲醇,乙醚 | 30 min | 糖蛋白 | PLP,丙酮 | 30 min | 脂质Forssman | 中性福尔马林 | 20 min | 抗原 | 2.5%硫代硫酸钠,冰冻切片不固定 | 20 min | 免疫电镜 | PLP,戊二醛,戊二醛—多聚甲醛(Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等 | 30min |
二、切片的处理与粘附。
免疫组化染色过程较长,洗的次数很多,而且均在振荡洗涤,抗原片附贴不紧,往往在最后的时刻,还没有等显色就会脱落导致前功尽弃,这个环节 虽小却会影响大局,因此,为了保证切片染色成功必须把切片处理好,解除掉片的后顾之忧(方法见第一章 )。
|
|
|