附录2　抗蛇毒血清效价测定方法（小白鼠试验法）

1　试剂

1.1　标准抗蛇毒血清

由中国药品生物制品检定所分发。标准抗蛇毒血清应保存于2～8℃。

1.2　蛇毒

由检定所分发。试验用的蛇毒须以检定所分发的标准抗蛇毒血清准确标定其试验量（蝮蛇、眼镜蛇及银环蛇1个L+，五步蛇2个L+）。使用干毒时，须以精确的分析天平称取，每次称取量不得少于5mg，溶解后应在3天内（保存于2～8℃）用完。干毒应封存于装有干燥剂的真空器皿中。亦可将干毒制成液体甘油蛇毒，即干毒溶解液与中性甘油（经116℃10分钟灭菌）等量混合，每ml至少含50个试验量，保存于2～8℃暗处。

1.3　稀释液

硼酸盐缓冲盐水，灭菌后pH应为7.0～7.4。配方为：

氯化钠8.5g

硼酸　4.5g

硼砂0.5g

加蒸馏水至1000ml，过滤。

2　用具

吸管、容量瓶、注射器应经标化。吸管、试管、容量瓶应洁净干燥，其他用具应灭菌。

3　试验动物

体重18～20g健康小白鼠。

4　试验方法

4.1　稀释标准抗蛇毒血清

用稀释液稀释标准抗蛇毒血清使每ml含抗银环蛇、眼镜蛇或抗蝮蛇毒血清5U、或抗五步蛇毒血清10U，即与5个相应蛇毒试验量混合后每0.4ml注射量中含1U或2U。

4.2　稀释蛇毒

用稀释液稀释蛇毒，使其5个试验量不超过0.8ml，在与抗蛇毒血清混合时补加稀释液至2ml，即每0.4ml注射量中含1个试验量。

4.3　稀释待检抗蛇毒血清

用稀释液将待检抭蛇毒清稀释成数个稀释度，使每ml抗蝮蛇、眼镜蛇或银环蛇毒血清约含5U或其上下：抗五步蛇毒血清约含10U或其上下。各稀释度间隔5%～10%。

4.4　混合

4.4.1　待检组

定量吸取不同稀释度之待检抗蛇毒血清各1ml，分别装入小试管中，每管加入5个试验量与待检抗蛇毒血清相应的稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

4.4.2　对照组

按下表定量吸取已稀释之待检抗蛇毒血清相应的标准抗蛇毒血清，分别装入小试管中：

对照①

对照②

标准抗眼镜蛇毒血清　1ml　1.2ml

每管加入5个试验量之相应稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

4.5　注射

每个稀释度的待检抗蛇毒血清、对照①及对照②各注射小白习4只，每只腹腔注射0.4ml。应注意勿使注射液流出。

4.6　观察

试验小白鼠每日观察1次，并记录发病及死亡情况，抗银环蛇毒血清及抗五步蛇毒血清之试验小白鼠观察48小时，抗腹蛇毒血清及抗眼镜蛇毒血清之试验小白鼠观察72小时。

4.7　结果判定

对照①小白鼠死亡50%以上，对照②小白鼠应比对照①死亡晚或不死亡。待检抗蛇毒血清之效价应以与对照①小白鼠同时死亡之最高稀释度判定。